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中瑞祥解析活性氧測定儀的使用步驟
瀏覽次數:553發布日期:2025-06-13

?中瑞祥解析活性氧測定儀的使用步驟

 

活性氧測定儀 使用原理?主要基于熒光探針 DCFH-DA 2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯)的氧化反應。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞后被細胞內的酯酶水解生成DCFH2',7'-二氯二氫熒光素)。DCFH不能通透細胞膜,從而被細胞內的活性氧(ROS)氧化生成有綠色熒光的DCF(二氯熒光素)。DCF的熒光強度與細胞內ROS的水平成正比,因此可以通過檢測DCF的熒光強度來定量測定細胞內的ROS水平?

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活性氧測定儀的使用步驟

?裝載探針?:對于刺激時間較短的細胞(通常為2小時內),先裝載探針后再進行刺激;對于刺激時間較長的細胞(通常為6小時以上),先進行刺激后再裝載探針。

?細胞準備?:檢測前一天進行細胞鋪板,確保檢測時細胞數量小于5×10^5/mL

?藥物誘導?:去除細胞培養液,加入無血清培養基稀釋的藥物處理,于37℃細胞培養箱內避光孵育,實際誘導時間由藥物特性和細胞類型決定。

?陽性對照?:可選步驟,先用無血清培養基稀釋陽性對照(如Rosup)到常用工作濃度,加入細胞中孵育30分鐘至4小時,以提高活性氧水平。

?探針裝載?:吸除處理藥物,加入稀釋好的DCFH-DA工作液,37℃細胞培養箱內避光孵育30分鐘。

?細胞清洗?:用無血清培養液洗滌細胞1-2次,以去除未進入細胞的DCFH-DA

?熒光檢測?:使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀等設備,在激發波長502 nm、發射波長530 nm附近檢測DCF的熒光強度?

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活性氧測定儀的應用領域和重要性

活性氧(ROS)在細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡等生理和病理過程中起著重要作用。通過測定細胞內的ROS水平,可以了解細胞在不同條件下的氧化應激狀態,對于研究疾病機制、藥物毒性評估以及開發新的治療方法具有重要意義。此外,活性氧測定儀還廣泛應用于生物醫學研究、環境監測和食品安全等領域?


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